اندوتوکسین نوعی سم است که در درون سلول باکتری وجود دارد. این سم پس از تجزیه یا مردن یا متلاشی شدن یاخته باکتریایی آزاد میشود. مانند اندوتوکسین پسودوموناس آئروژینوزا. زهرابه یا توکسین سمی است که در باکتری وجود دارد یا باکتری آن را ترشح نموده است و به دو نوع درونزهرابه و برونزهرابه تقسیم میشوند. در واقع درونزهرابهها اغلب جزو ساختمان باکتری هستند، مثلاً اندوتوکسینهای باکتریهای گرم منفی اجزاء آلی دیواره باکتری میباشند که از نظر بیولوژیکی فعال هستند. اندوتوکسینها مولکول های لیپیدی هستند که قسمتی از دیواره باکتری میباشند.
کیت سنجش اندوتکسین چیست؟
آزمایش اندوتوکسین برای تشخیص اندوتوکسین ها از باکتری های گرم منفی است. در ابتدا از خرگوشها برای تشخیص و اندازهگیری اندوتوکسینها در محصولات دارویی استفاده میشود. با توجه به USP <151>، RPT شامل نظارت بر افزایش دما یا تب بعد از تزریق داخل وریدی دارو به خرگوشها می شود و 21 CFR 610.13 (b) نیاز به آزمایش آروماتیک خرگوش برای محصولات زیستی مشخص دارد. کیت سنجش اندوتکسین را میتوان به خوبی در تست اندوتکسین محصول نهایی برای داروهای تزریقی انسان و حیوانات، محصولات بیولوژیکی و دستگاههای پزشکی استفاده نمود.
روش ارزیابی اندوتکسین
با دقت ۱۰۰ میکرولیتر از نمونه استاندارد و یا آزمایش را در گلدانهای بدون اندوتوکسین جدا کنید. همه نمونهها باید به مدت ۳۰ ثانیه با گرداب مخلوط شوند. از کف کردن / حباب خودداری کنید. هر آزمایش باید شامل یک خالی و همچنین حداقل چهار استاندارد اندوتوکسین در کپی باشد. ویال نمونه خالی حاوی ۱۰۰ میکرولیتر از آب معرف معرف LAL به جای نمونه آزمایش است. ۱۰۰ میکرولیتر LAL بازسازی شده را به هر ویال اضافه کنید. ویالها را درپوش کرده و با چرخاندن به آرامی هم بزنید.
اگر غلظت آندوتوکسین در نمونه در محدوده ۰٫۰۱ – ۰٫۱ EU / میلی لیتر پیش بینی شده است ، با استفاده از یک حمام آب یا بلوک گرمایش ، قفسه را با تمام ویالها در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد – ۱ درجه سانتیگراد به مدت ۴۵ دقیقه انکوبه کنید. اگر انتظار میرود غلظت آندوتوکسین در دامنه ۱/۰ – ۱ EU / میلی لیتر باشد ، به مدت ۱۰ دقیقه در دمای ۱ درجه سانتیگراد-۱ درجه سانتی گراد انکوبه کنید.
بعد از جوجهکشی مناسب ، ۱۰۰ میکرولیتر محلول بستر کروموژنیکی بازسازی شده را به هر ویال اضافه کنید. ویالها را بپوشانید و به آرامی بچرخانید تا خوب مخلوط شوند. برای جلوگیری از کف زدن ، لرزش یا گرداب را تکان ندهید. به مدت ۶ دقیقه در دمای ۱۷ درجه سانتیگراد-۱ درجه سانتیگراد انکوبه کنید. ۵۰۰ میکرولیتر از محلول تنظیم کننده شماره ۱ رنگ (Stop Solution) را به هر ویال اضافه کنید و به آرامی چرخش کنید تا خوب مخلوط شود. برای جلوگیری از کف زدن ، لرزش یا گرداب را تکان ندهید. ۵۰۰ میکرولیتر از ثبات کننده رنگ شماره ۲ بازسازی شده را به هر ویال اضافه کنید و خوب مخلوط کنید. در آخر ۵۰۰ میکرولیتر از ثبات دهنده رنگ شماره ۳ بازسازی شده را به هر ویال اضافه کنید. هر ویال را به آرامی چرخانده تا خوب مخلوط شود. حواستان باشد که باید از به وجود آمدن حباب اجتناب شود.
میزان جذب هر ویال واکنش را در ۵۴۵ نانومتر با استفاده از آب مقطر به عنوان خالی بخوانید تا نور سنج را به میزان صفر جذب کنید. تشخیص بسیار خاص و قوی آندوتوکسین (LPS) به شما کمک میکند تا در تصمیم گیریهای کنترل فرآیند (IPC) و تصمیمگیری در مورد انتشار محصول اطمینان داشته باشید.
خرید کیت اندوتوکسین
قیمت این محصول به عوامل متفاوتی بستگی دارد. شرکت سازنده، میزان دقت آزمایش، نوع کیت، شرایط افتصادی و نوسانات بازار از جمله نکاتی است که در تعیین قیمت کیتهای سنجش اندوتوکسین به شدت موثر هستند. مهمترین نکتهای که در تهیه این کیتها مهم است و به دلیل ارتباط با جان و سلامتی موجودات زنده این است که حتما از فروشگاههای معتبر خریداری شود تا کیت های اصل و کاربردی برای انجام آزمایشهای اصلی فراهم شود.